細胞化學技術是什麼

Ⅰ 什麼是細胞化學法,在細胞內脂類的顯示中有什麼

細胞化學法：是指在不破壞細胞形態結構的狀況下，用生化的和物理的技術對各種組分做定量的分析，研究其動態變化，了解細胞代謝過程中各種細胞組分的作用。

在細胞內脂類的顯示可以採用自發熒光或吸收熒光素的方法，確定脂類的位置與分布狀態。

(1)細胞化學技術是什麼擴展閱讀：

蛋白質的顯示：

顯示蛋白質所用的米氏反應，其中硝基汞試劑作用於細胞中蛋白質側鏈上的酪氨酸基，形成紅色沉澱，在重氮基反應中氫氧化重氮與酪氨酸、色氨酸和組氨酸基反應形成有顏色的復合物。

某些碳水化合物、酯類和DNA可用對其醛基有特異結合的試劑，如雪夫氏試劑。對核酸的染色方法與核苷酸磷酸、碳水化合物和嘌呤及嘧啶的三種成分的特性有關。

Ⅱ 細胞化學法和細胞化學技術一樣嗎

細胞化學法和細胞化學技術不一樣。根據查詢公開信息顯示：
1、細胞化學技術不是單一的技術，而是一整套有關聯的技術，包括酶細胞化學技術，免疫細胞化學技術，放射自顯影技術，示蹤細胞化學技術等。
2、細胞化學法:是指在不破壞細胞形態結構的狀況下，用生化的和物理的技術對各種組分做定量的分析，研究其動態變化，了解細胞代謝過程中各種細胞組分的作用。

Ⅲ 免疫細胞化學技術的概述

免疫組化，是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。 · 具有特異性高和親和力強的抗體是實驗成功的首要條件。
– 對抗體的要求：純度高、比活性強；
· 高度特異性抗體的獲得，取決於抗原的純度。
– 對抗原的要求：純度高，免疫原性強，穩定無變化。 · 抗原的概念：凡是在機體內引起體液免疫和(或)細胞免疫反應的物質，稱為抗原。抗原具有兩個方面的特性：
– 免疫原性：引起機體產生抗體和(或)致敏淋細胞的特性；
– 免疫反應性：抗原能與相應的抗體及致敏淋巴細胞發生特異的結合或反應的特性。
· 根據抗原是否顯示免疫原性分為：
– 完全抗原：分子量較大，一般在10kDa以上，並具有較復雜的化學組成。
· 免疫原性最強的是蛋白質抗原，多糖次之；脂類和核酸必需和蛋白質及多糖形成復合物才具有良好的免疫原性。
– 半抗原：又稱為不完全抗原，分子量較小。例如：某些短肽、多糖、類脂和葯物等。
· 半抗原必需與載體結合，才能獲得免疫原性。
載 體
· 通常是具有高度免疫原性的大分子物質，具有將免疫原性傳遞給耦聯的半抗原能力。
– 常用的載體有鑰孔血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin，KLH)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)、卵白蛋白(Ovalbumin，OVA)等。
– 用戊二醛或碳化二亞胺作為交聯劑通過功能基團-NH2、-COOH等將半抗原結合到載體上。結合比例為5kDa結合5～25個分子的小肽。 1、抗體的概念：
· 機體受到抗原刺激後，由漿細胞合成並分泌出一類具有與抗原發生特異性結合的球蛋白，被稱為抗體。
– 抗體主要存在於血清內；
– 抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白並不一定都是抗體。
– 免疫球蛋白根據重鏈的結構及抗原特異性不同分為五種，既IgG、 IgD、IgE、 IgA、IgM。
2、免疫組化實驗中常用的抗體：單克隆抗體和多克隆抗體。
· 單克隆抗體：是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體，是應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物制備的。
– 特異性強、抗體產量高。
· 多克隆抗體：是將純化後的抗原直接免疫動物後，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細胞克隆所產生的抗體混合物。
– 特異性低，會產生抗體的交叉反應。
– 多克隆抗體廣泛應用於石蠟包埋組織切片，可減少假陰性染色機會。
– 抗原與抗體的結合，要求量保持一定比例，當抗原或抗體過量時，是不能聚合成大顆粒。
3、抗體的制備——多克隆抗體的制備
· 動物的選擇
· 佐劑(adjuvant)
· 免疫方法
· 免疫劑量
· 抗體效價的測定
· 放血或定期抽血
(1) 動物的選擇
選擇什麼動物來免疫取決於：
· 所需抗血清的量
– 小鼠只能提供1.0～1.5ml的血液，而山羊能提供幾升。
· 能供免疫用的抗原量
– 小鼠50μg足夠，而山羊需要幾毫克。
(1) 動物的選擇(續)
· 動物的品系：免疫動物與提供抗原的動物之間的種系差異越大越好。
– 例如哺乳動物的抗原可選擇非哺乳動物來制備抗體。
– 常用的動物有兔、羊、馬、豬等，以兔(紐西蘭兔，年輕，健壯，體重在2.5kg左右，雄性)為最常用。
(2) 佐劑 (adjuvant)
· 一般可溶性抗原注射後，迅速從注射部位擴散、吸收代謝。佐劑可延長滯留時間，且延長免疫刺激作用。因此在制備抗體的過程中，常將抗原和佐劑一起注射。
· 最常用的佐劑是弗氏佐劑，又分為：
– 弗氏不完全佐劑(Freund's incomplete adjuvant)
– 弗氏完全佐劑(Freund's complete adjuvant)
弗氏不完全佐劑
(Freund's incomplete adjuvant, FIA)
· 是由油劑(石蠟油或植物油)與乳化劑(羊毛脂或Tween80)混合而成，比例為1:1、2:1、3:1或5:1，可根據需要而定，通常2:1。
· 使用時與水溶性抗原按1:1比例充分混合，使抗原分散在佐劑中形成油包水乳劑。
弗氏完全佐劑 (Freund's complete adjuvant, FCA)
· 在弗氏不完全佐劑中加入活卡介苗或死的結核分枝桿菌(終濃度為2～20mg/ml)，即成為FCA。
· 免疫動物時，將弗氏佐劑與抗原按體積 1:1 混合乳化後(油包水)注入動物。
– 一般首次注射時用完全佐劑乳化，第二次或第三次注射時用不完全佐劑或不用佐劑。
佐劑與抗原乳化的方法
· 研磨法：適於制備大量的佐劑抗原
– 先將不完全佐劑加熱，取1.73ml放人無菌玻璃研缽內；緩緩滴入0.23ml活卡介苗，邊滴邊按同一方向研磨，使菌體完全分散。
– 按同樣方法滴人抗原，每加一滴應研磨至小滴消失。滴加抗原的速度要慢，待抗原全部加人後，應成為乳白色粘稠的油包水乳劑。
· 缺點：研缽壁上粘附大量乳劑，抗原損失較大，對微量或難得抗原不宜採用。
佐劑與抗原乳化的方法(續)
· 注射器混合法
– 將等量的完全佐劑和抗原分別吸人兩個5ml注射器內，然後插入三通管內，交替推動針管混勻，往復操作直至形成粘稠的乳劑為止。
· 優點：無菌操作，節省抗原或佐劑。
· 缺點：不易乳化，時間長。
佐劑與抗原乳化的方法(續)
· 快速乳化法：利用超聲波粉碎器可快速乳化抗原和佐劑混合物。
– 將抗原和佐劑按所需量加入一離心管中，置於超聲波粉碎器上，粉碎頭浸入液面下 0.5cm，離瓶底0.5cm左右，以免打碎離心管。
– 每次乳化 10～15s，然後置冰箱lmin左右。反復乳化3～4次即可完全乳化。管內殘餘量800r/min離心5～10min收集。
· 優點：簡單、快速、節省材料。
乳化劑的鑒定
· 判斷乳化是否充分，可將一滴乳化好的液體滴在水面上(冷水中)，如能長時間保持圓珠形而不散開，表示乳化達到要求。
(3) 免疫方法——免疫途徑
· 常有靜脈、腹腔、肌肉、皮下、皮內、淋巴結、腳掌等注射。
· 一般採用多點注射方法
– 常在足、掌、腋窩淋巴結周圍、背部兩側、頜下、耳後等處的皮內或皮下。
– 皮內易引起細胞免疫反應，有利於提高抗體的效價。
(3) 免疫方法——免疫途徑 (續)
· 幾點說明：
– 大動物一般不用腹腔注射
– 顆粒抗原和使用佐劑時不能靜脈注射
– 抗原寶貴可採用淋巴結內微量注射法，只需10～100g抗原即可獲得較好的免疫效果。
– 皮內注射較困難，特別是天冷時更難注入。
(3) 免疫方法——次數及間隔時間
· 次數一般為2～3次(初次免疫和加強免疫)
– 首次注射後，10～15天再加強注射；
– 劑量同首次或為首次的一半，用不全佐劑或不用佐劑。
· 間隔時間，一般而言，動物越大，間隔越長
– 豚鼠、大鼠為7～8天，兔子為10～15天，羊為14～28天；
– 第三次注射的間隔時間更長些，效果更好。
舉例1：家兔的免疫
· 初次免疫
– 用50～200g Ag加入FCA，在背部皮下注射6～8點，每點0.1～0.2ml，也可肌肉內或皮內注射；
· 兩周後，加強免疫
– 將50～200g Ag於PBS或FIA中，在肌肉、皮下、靜脈或腹腔內注射；
· 抗體效價的檢測：加強免疫一周後，耳緣靜脈采血
– 抗體效價測定可用環狀沉澱試驗、瓊脂雙向擴散法等方法。前者抗體效價在1:4000以上，後者在1:16以上，即可采血，取血清進一步提純。
舉例2：微量抗原淋巴結內注射免疫家兔
· 一般選擇2.5～3.0kg的紐西蘭種公兔
– 先在其兩腳墊注射完全福氏佐劑0.2ml(卡介苗每兔合5mg)；
– 10天後，見胭窩淋巴結腫大，然後將抗原注射至腫大的淋巴結內，第一次注射抗原用完全福氏佐劑混合乳化；
– 以後每隔20天用不完全福氏佐劑乳化抗原，以同樣方法加強2次，各次注射的抗原均為25～50g；
– 末次注射兩周後兔耳放血測價 (可達1:128)。
舉例3：豚鼠和大鼠的免疫
· 初次免疫
– 用10～100g Ag加入FCA，在背部皮內注射4～6點，每點 0.lml，也可肌肉內或皮下注射；
· 加強免疫
– 每隔 7～8天，將10～50g Ag於 PBS或FIA中。在肌肉、皮下或靜脈注射；
· 抗體效價的檢測
(4) 免疫劑量
· 抗原性強的抗原量應小，過大反會引起免疫抑制；
· 免疫周期長的動物可少量多次注射，短的可大量少次。
(4) 免疫劑量 (續)
· 各種動物首次免疫抗原劑量和加強免疫的劑量
(5) 抗體效價的檢測
多采免疫雙向擴散法
【基本原理】
· 指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散，彼此相遇後形成特異性的沉澱線。
– 將抗原與抗體分別加入同一凝膠板中兩個相隔一定間距的小孔內，使兩者進行相互擴散，當抗原抗體濃度之比相適宜時，彼此相遇形成一白色弧狀沉澱線。
· 優缺點：簡便，但敏感性較低，易出現假陰性結果。
免疫雙向擴散法的操作步驟
· 將玻璃板用水洗凈後用75%乙醇沖洗，晾乾後放在水平台上備用。
· 將l % agar 融化後，置56C水浴。
· 在玻璃板上鋪膠，約1.5mm 厚，凝固後打孔(直徑 3rnm)，孔間距10mm。
· 中心孔加5l 抗原樣品，周圍孔內每孔加5l 抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
· 凝膠板置濕盒內，室溫擴散24h。
· 觀察結果。
抗體效價檢測的其它方法
· 環狀沉澱試驗，需較多的抗血清，現已很少用；
· 對流免疫電泳，比瓊脂免疫雙擴散法敏感，較簡便、實用；
· 酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)。
(6) 放血或定期抽血
常用以下3種方法
· 頸動脈放血法：放血量較多，動物不易中途死亡。例如：2.5kg白兔可放血約80ml。家兔、山羊、綿羊等動物采血常用此法。
· 心臟采血法：常用於家兔、豚鼠、大白鼠、雞等小動物，但操作不當易引起動物死亡。
· 靜脈采血：家兔可用耳緣靜脈采血；山羊、綿羊、馬和驢可用頸靜脈采血，這種放血法可隔日1次，有時可採集多量血液。
(6) 放血或定期抽血 (續)
· 采血過程中，動作要輕柔，盡量避免溶血
· 血液凝固後，及時離心收集血清，否則細胞溶解釋放的雜蛋白(例如蛋白水解酶)將污染抗體並將抗體水解，降低效價；
· 加疊氮化鈉，分裝，低溫保存，也可加一定的保護劑如BSA、甘油等。

Ⅳ 原位雜交技術和免疫細胞化學技術的聯系與區別

原位雜交技術的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的鹼基序列，將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對，結合成專一的核酸雜交分子，經一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。
免疫細胞化學是用標記的特異性抗體（或抗原）對組織內抗原（或抗體）的分布進行組織和細胞原位檢測技術。
一個是用核酸序列檢測，一個使用抗體或抗原檢測
它們都可以定位

Ⅳ 免疫細胞化學技術的介紹

免疫細胞化學，又稱免疫組織化學，其主要原理是用標記的抗體或抗原對細胞相應抗原或抗體進行定性、定位或定量檢測，經過化學的呈色反應後，用顯微鏡或電子顯微鏡觀察。該技術是免疫熒光技術與形態學技術結合的產物。

Ⅵ 免疫組織化學技術的介紹

免疫組織化學技術又稱為免疫細胞化學技術，是指用標記的特異性抗原或抗體在組織細胞原位通過抗原抗體的免疫反應和組織化學的呈色反應，對相應的抗原或抗體進行定性、定位、定量測定的一項免疫學檢測方法。

Ⅶ 細胞化學法和細胞化學技術的區別

含義不同，作用不同。
1、含義方面。細胞化學法是指在不破壞細胞形態結構的狀況下，用生化的和物理的技術對各種組分做定量的分析，而細胞化學技術利用抗原和抗體的結合具有高敏感性和特異性的特點。所以二者的含義是不同的。
2、作用方面。細胞化學法是了解細胞代謝過程中各種細胞組分的作用，而細胞化學技術作用觀察細胞的生長。所以二者的作用是有區別的。

Ⅷ 酶免疫細胞如何進行化學染色

免疫組織化學技術（immunohistochemistry）又稱免疫細胞化學技術（immunocytochemistry）是利用已知的抗體與細胞抗原特異性相結合的特性，通過化學反應使標記在抗體上的顯示劑顯示一定的顏色，並藉助顯微鏡、熒光顯微鏡或電鏡進行觀察，以達到對組織、細胞結構中化學成分進行定量、定位分析的目的。 免疫細胞化學染色是將血液、骨髓液、漿膜腔積液等等各種體液組織製成的塗片和骨髓等組織的切片經各種單克隆抗體的標定和常用的過氧化物酶或鹼性磷酸酶顯色後對白血病細胞直接鏡檢，以確定細胞類型。
免疫組織化學染色方法繁多，可根據標記物的不同分為：免疫酶細胞化學染色、免疫熒光細胞化學染色、免疫金銀染色技術以及親合免疫組織化學染色技術等。目前血液系統疾病檢查常用免疫細胞化學染色方法有三種：過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法、鹼性磷酸酶-抗鹼性磷酸酶（APAAP）法和親和素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC-AP）法。PAP法抗原、抗體反應及酶標原理與APAAP法完全相同，都屬於免疫組織化學反應，只是所標記的酶不同。PAP法酶化學反應原理與ABC-AP法完全相同，但ABC-AP法為親合免疫組織化學反應。在染色步驟及方法上PAP法和ABC-AP法完全相同。
免疫細胞化學能夠識別抗原蛋白質一級結構中氨基酸的差別，從而對細胞結構、功能及細胞代謝等進行綜合分析，確定細胞的類型、來源及細胞的分化階段。應用骨髓切片免疫組織化學技術可以對骨髓細胞進行原位觀察，通過對細胞特異性抗原的定性、定位和定量分析，了解骨髓組織和細胞的結構和變化，這對血液系統疾病尤其是血液系統腫瘤的診斷、鑒別診斷，以及血液腫瘤的分類、分型和預後的判斷提供了有利的研究手段。

Ⅸ 什麼是細胞化學技術

糖類只含有c.h.o三種元素，都不可以用來標記（因為別的物質中基本也含有這三種元素，不能確定到底是哪一種物質中的），蛋白質含有c.h.o.n.s.p等元素，p.s都可以用來標記。

Ⅹ 什麼是細胞化學法，在酸鹼性蛋白染色中有什麼應用

細胞化學是研究細胞的化學成分，在不破壞細胞形態結構的狀況下，用生化的和物理的技術對各種組分做定量的分析，研究其動態變化，了解細胞代謝過程中各種細胞組分的作用，是在細胞活動中的變化和定位的學科。
用於細胞化學研究的染料可以是鹼性的也可以是酸性的。酸性染料的生色基團是硝基和醌基；鹼性染料的生色基團，包括著偶氮基吲胺基。染色的原理是基於在酸性染料中具有染色作用的陰離子和細胞內的鹼性物質相結合，而鹼性染料中的陽離子和細胞內的酸性物質相結合，所以酸性的細胞成分被鹼性染料所染色，而鹼性的細胞組分則被酸性染料染色