㈠ 請問做PCR跑完電泳後還有哪一些步驟
看你的目的了，要是想知道pcr產物的序列，就是
切膠，回收，連接，轉化，挑單克隆搖菌，提質粒，送測序
㈡ 簡述PCR技術操作步驟
PCR即聚合酶鏈式反應（Polymerase chain reaction）的縮寫，它是體外酶促合成特異DNA片段的方法。這一方法的要點是合成兩個分別互補於待擴增DNA片段兩端的小片段引物，在含有引物、待擴增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反應體系中DNA復制反復進行，在短時間內可以取得大量擴增產物。其原理是寡聚核苷酸鏈引物在DNA聚合酶的作用下沿模板延伸，合成兩個與靶DNA兩側序列互補的引物，在體外進行靶DNA的重復合成。
主要的技術步驟是：
（1）DNA變性 加熱使靶DNA序列雙鏈解離成單鏈DNA。
（2）引物與靶DNA退火 適當降低溫度，使兩個引物分別結合成靶DNA兩條的3′末端向5′末端延伸。
（3）引物延伸 在DNA聚合酶的催化下，引物沿著靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA鏈在變性解離後，又可作為模板與引物雜交，並且在DNA聚合酶的催化下，引導合成新的靶DNA鏈。如此反復進行以上3個步驟，即可使靶DNA片段指數性擴增。
㈢ 如何從pikoreal熒光定量pcr儀導出實驗數據
PikoReal設計小巧，反應速度快，靈敏度高。具有絕對定量，相對定量，熔解曲線分析，高解析度熔解曲線分析，等位基因分析等功能，是一款性能優越，並能成倍節省實驗成本的高性價比熒光定量PCR系統。
主要特點
整體式設計，系統穩定可靠-光學檢測系統和PCR系統高度整合，幾乎沒有移動部件。儀器長途運輸或長期使用後也不會導致光路系統偏移，無需光路矯正。
PCR系統快速高效-超快的反應速度能成倍節省實驗時間。獨特的設計能使反應體系小到5 ul，節省試劑，耗材和能源消耗。
控制分析軟體功能齊全，直觀易用-中文、英文、日文三種軟體界面可自由切換，一鍵點擊，分析報告自動生成。
㈣ PCR試驗的步驟
標準的PCR過程分為三步（如圖所示）：
1.DNA變性（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，
氫鍵斷裂，形成單鏈DNA
2.退火（復性）（40℃-65℃）：系統溫度降低，引物與
DNA模板結合，形成局部雙鏈。
3.延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活
性）的作用下，以dNTP為原料，從引物的5′端→3′ 端延
伸，合成與模板互補的DNA鏈。
每一循環經過變性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。
現在有些PCR因為擴增區很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的時間內復制完成，因此可以改為兩步法，即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行，以減少一次升降溫過程，提高了反應速度。
㈤ pcr過程是編輯學邊復制嗎
不是邊解旋邊復制啊,從解旋到引物結合再到復制,所需溫度都不一樣,所以是解旋後復制。
PCR技術:通過加熱使雙鏈DNA解開螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復上述過程至25-40個循環，達到體外擴增核酸序列的目的。
㈥ 在做任意引物PCR時，PCR成功之後該怎麼做
肯定是先跑個膠，看P出來了些什麼片段，有多少種片段，各個片段有多大，有沒有想要的片段，回收了去連載體或者去測序
㈦ pcr產物 跑膠及數據處理 問題。
1 不可以啊
2 須除去背景
㈧ PCR技術的操作步驟。
聚合酶鏈式反應是一種用於放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發、皮膚或血液，只要能分離出一丁點的DNA，就能用PCR加以放大，進行比對。這也是「微量證據」的威力之所在。由1983年美國Mullis首先提出設想，1985年由其發明了聚合酶鏈反應，即簡易DNA擴增法，意味著PCR技術的真正誕生。到如今2013年，PCR已發展到第三代技術。1973 年，台灣科學家錢嘉韻，發現了穩定的Taq DNA聚合酶，為PCR技術發展也做出了基礎性貢獻。x0dx0aPCR(聚合酶鏈式反應）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基於聚合酶製造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。x0dx0aPCR的原理x0dx0aDNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據鹼基互補配對原則復製成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。x0dx0a但是，DNA聚合酶在高溫時會失活，因此，每次循環都得加入新的DNA聚合酶，不僅操作煩瑣，而且價格昂貴，制約了PCR技術的應用和發展。x0dx0a耐熱DNA聚合酶--Taq酶的發現對於PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，並逐步應用於臨床。x0dx0aPCR技術的基本原理類似於DNA的天然復制過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間後，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；③引物的延伸：DNA模板--引物結合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈，重復循環變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的「半保留復制鏈」，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2～4分鍾，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。x0dx0a原料:x0dx0aDNA聚合酶鏈式反應技術簡稱PCR技術，是一種以模板DNA為基礎，在引物和4種脫氧核糖核苷酸存在的條件下，利用DNA聚合酶的酶促反應，完成對模板的目的片段的快速擴增的過程，其依賴於3個溫度的反復循環。x0dx0ax0dx0a每一循環的3個步驟為：x0dx0a(1)變性：即雙鏈DNA在94℃條件下，通過熱變性使模板的雙鏈DNA氫鍵斷裂而變成單鏈。x0dx0a(2)復性：即當變性溫度突然降至引物Tm值(通常為35～65℃)以下時，使引物與模板DNA互補序列雜交。由於引物一般由10～25個鹼基序列，模板DNA結構遠比引物分子復雜，且反應體系中引物分子的濃度又遠大於模板DNA，故在退火溫度時，引物與模板DNA容易結合形成互補鏈。x0dx0a(3)延伸：在DNA聚合酶的作用下，以DNA為模板和以4種脫氧核糖核苷酸為原料，在Mg2+存在的條件下。DNA聚合酶依賴於其5'→3'的聚合酶活力，以引物結合於DNA模板鏈為起始點。使引物的序列得以延伸，合成模板DNA的互補鏈。
㈨ pcr反應完成後如何保存
4°保存不要超過24個小時，在跑完pcr後放置擴增的產物會發生不可知的變化，產生未知的結果，我們老闆都是要求我們做完PCR立馬跑膠村結果
㈩ 進行PCR實驗時應注意哪些事項
首先，要確定你的模板DNA的濃度大概是多少，太稀和太濃都影響PCR結果，具體數據不記得了，只是我自己跑PCR時因為濃度問題失敗了很多次，通過多次調整濃度才得到較理想的結果。
其次，如果是自己提的DNA，要確保模板中沒有酒精（提DNA最後一步，一定要等酒精揮發完才能加TE）
最重要的是要探索一個好的退火溫度，退火溫度的高低可以以0.5℃的梯度變化確定，假如參考值為61℃，先跑一次，看結果，如果拖尾很長，則一個一個梯度增加退火溫度，但不能增得太急，我那時次增加5℃，結果跑出來全是很小很小的片段，大概都只有300bp了。
這是我跑PCR的一些經驗，僅供參考